毛細管電泳儀的操作莫大意,要注意這些細節
毛細管電泳儀是一類(lèi)以毛細管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅動(dòng)力的新型液相分析技術(shù),是分析科學(xué)中繼液相色譜之后的又一重大進(jìn)展,它使分析科學(xué)得以從微升水平進(jìn)入納升水平,并使單細胞乃至單分子分析成為可能,使長(cháng)期困擾我們的生物大分子如蛋白質(zhì)的分離分析也因此有了新的思路。該儀器可用于對有機化合物、無(wú)機離子、中性分子、手性化合物、蛋白質(zhì)和多肽、DNA和核酸片段的分析。廣泛應用于環(huán)境保護、生物化學(xué)、醫學(xué)衛生、臨床檢測、司法、食品衛生、藥品檢測、農業(yè)化學(xué)等領(lǐng)域。
分析原理:
檢測原理基于被測組分和背景電解質(zhì)的吸光度不同,當被測組分通過(guò)檢測窗時(shí),吸光度發(fā)生的變化服從朗伯-比爾定律,即在一定的實(shí)驗條件下,吸光度與被測組分的濃度成正比。
毛細管電泳儀對進(jìn)樣技術(shù)要求很高,進(jìn)樣操作事項如下:
1、進(jìn)樣區帶越小越好:
無(wú)論采用何種進(jìn)樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細管總長(cháng)度的1%~2%,以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細吸附進(jìn)入毛細管而影響進(jìn)樣量的性。樣品管中溶液少為5μL,進(jìn)樣體積為1~50nL。
2、進(jìn)樣時(shí)間以短為宜:
通常進(jìn)樣時(shí)間為0.5~1s,此時(shí)毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。雖然進(jìn)樣時(shí)間可至±0.1s,但由于毛細管插入樣品管時(shí)不可避免地會(huì )粘附一些溶液,進(jìn)樣時(shí)間過(guò)短會(huì )影響分析的重復性。
3、樣品預濃縮:
受毛細管內總體積的制約,對于濃度很稀的樣品,不能像HPLC那樣可加大進(jìn)樣量來(lái)提高檢測靈敏度,但可采取一些措施來(lái)改善。
4、毛細管插入樣品溶液后,應立即開(kāi)始進(jìn)樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開(kāi)始電泳。否則會(huì )產(chǎn)生毛細作用和虹吸現象,引起誤差并使譜帶展寬。
5、電極不要和毛細管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應保持平衡。
6、使毛細管電泳儀盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進(jìn)樣量的恒定。