熒光分光光度計的基本測定流程

　　熒光分光光度計是一種常用的光度計產(chǎn)品，主要用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜，被廣泛用于多個(gè)行業(yè)中。今天我們主要來(lái)介紹一下它的基本特點(diǎn)及操作，希望可以幫助用戶(hù)更好的應用產(chǎn)品。

　　它能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過(guò)對這些參數的測定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化， 從而闡明分子結構與功能之間的關(guān)系。能夠對經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析，可應用于生物化學(xué)、生物醫學(xué)、環(huán)境化工等部門(mén)，可以說(shuō)是有很重要的用途。

　　基本測定：

　?。?）熒光激發(fā)光譜測定

　　設置熒光分光光度計參數，掃描發(fā)射波長(cháng)，找到maxλem，以此為發(fā)射波長(cháng)，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長(cháng)的函數，便得到激發(fā)光譜。

　?。?）熒光發(fā)射光譜測定

　　設置儀器參數，掃描激發(fā)波長(cháng)，找到maxλex，以此為激發(fā)波長(cháng)，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長(cháng)間的函數關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。

　?。?）差譜測定

　　設置儀器參數，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來(lái)，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長(cháng)，得到當時(shí)的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。

　?。?）峰面積積分

　　選擇適當的工作方式，對樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。

　?。?）熒光強度

　　選擇合適的測量參數，設置λex、λem，采用定點(diǎn)讀數或掃描方式，即可測得所選波長(cháng)處的熒光強度。

　?。?）定量測定

　　配制一系列已知濃度的標準溶液，在一定的測定條件下，設置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度—濃度的工作曲線(xiàn)，不改變熒光分光光度計參數測定未知溶液的熒光強度，由工作曲線(xiàn)即可求出未知溶液的濃度。